Приготовление срезов

Общие сведения. Окраска гистологических срезов основана на неодинаковом сродстве тканевых элементов к определенным красителям. Ядра клеток более способны окрашиваться основными, а цитоплазма — кислыми красками. Соответственно этому различают основные, или ядерные, и кислые, или диффузные, краски.

Наиболее часто в обычной ветеринарной патологоанатомической практике применяются окраски срезов гематоксилин-эозином по Ван-Гизону, Перлсу, Суданом III и др.

Окраска гематоксилин-эозином. Окрашивают срезы в маленьких чашках Петри или на стеклах. Этот метод применяется для окраски срезов, приготовленных любым способом. При этом ядра клеток приобретают фиолетово-синий или густо-синий цвет, а цитоплазма и волокнистое вещество — светло-синий или розово-красный. Жиры и липоиды не окрашиваются. Эритроциты млекопитающих, поскольку они ядер не содержат, окрашиваются только эозином.

Окраску срезов в чашках Петри производят следующим образом.

1. Срез переносят препаровальной иглой из воды в раствор гематоксилина на 2—5 мин.

2. Промывают в воде 2—5 мин.

3. Погружают на 10—20 с в 1%-ный раствор соляной кислоты на 70° спирте (если срез сильно перекрашен гематоксилином, его следует держать в этом растворе несколько дольше).

4. Промывают в чистой воде 5—10 мин.

5. Промывают в слабощелочном растворе (в баночку с водой прибавляют 1—2 капли нашатырного спирта) 10 мин.

6. Промывают снова чистой водой в течение 10— 15 мин. Если срез после щелочной воды недостаточно промыт, он плохо опрашивается эозином.

7. Окрашивают эозином в течение 3—5 мин.

8. Промывают в течение 1—2 мин водой. 280

9. Обезвоживают в спиртах восходящей крепости— 75, 90, 100°. Если срез перекрашен эозином, его следует несколько дольше держать в 75° спирте.

10. Просветляют в карболксилоле.

11. При помощи шпателя и иголки срез переносят на предметное стекло.

12. Высушивают фильтровальной бумагой.

13. На срез наносят каплю канадского или пихтового бальзама и накрывают покровным стеклом.

Окраска по Ван-Гизону. В срезах, окрашенных по Ван-Гизону, соединительная ткань красится в ярко-красный, остальные ткани — в желтый или серовато-желтый цвет. Ядра окрашиваются в черный или тёмно-фиолетовый цвет.

Окраску производят следующим образом.

1. Срезы интенсивно окрашивают гематоксилином (лучше гематоксилин Вейгерта) и споласкивают в воде.

2. Сразу переносят в пикрофуксин на 3—5 мин (смесь насыщенного водного раствора пикриновой кислоты—150,0 и насыщенного водного раствора кислого фуксина — 3,0—5,0).

3. Быстро промывают в воде (вода извлекает из среза фуксин).

4. Обезвоживают 95° спиртом 1—2 мин.

5. Просветляют в карболксилоле и заключают в пихтовый бальзам, как при окраске гематоксилин-эозином.

Окраска Суданом III. Судан III — нейтральная азокраска, растворимая в спирте, ацетоне и жирах, не растворимая в воде. Окраску Суданом III производят для определения в срезах жиров и липидов. Техника окраски следующая.

1. Замороженные срезы переносят изводы на 0,5— 1 мин в 50° спирт.

2. Срезы помещают в свежефильтрованный раствор Судана на 10—20 мин.

3. Споласкивают 50° спиртом в течение 0,5—1 мин.

4. Тщательно промывают водой в течение 10 — 15 мин.

5. Срезы подкрашивают квасцовым гематоксилином Эрлиха или Бемера.

6. Промывают водой в течение 3—5 мин. Перекрашенные в гематоксилине срезы дифференцируют в 1%-ном водном растворе соляной кислоты, споласкивают подщелоченной водой, затем чистой водой.

7. Заключают в глицерин или глицерин-желатину.

8. Накрывают покровным стеклом.

Окраска по Перлсу. Этот способ окраски применяют для выявления в тканях гемосидерина.

1. Из дистиллированной воды срезы переносят стеклянными иглами на 15—20 мин в свежеприготовленную смесь, состоящую из одной части 2%-ного раствора желтой кровяной соли и полутора частей 1%-ного водного раствора соляной кислоты.

2. Промывают дистиллированной водой в течение 5—10 мин.

3. Докрашивают квасцовым кармином 15—20 мин.

4. Ополаскивают в воде и проводят через спирты, карболксилол и бальзам.

Железосодержащий пигмент — гемосидерин — приобретает синевато-зеленоватый или голубоватый цвет.

Окраска по Туревичу. По способу Туревича окрашивают срезы, изготовленные из мозга, для диагностики бешенства. При этом тельца Бабеша — Негри и эритроциты окрашиваются фуксином в красный цвет, нервные клетки гематоксилином — в синий.

Для гистологического исследования берут кусочки аммонова рога и мозжечка, фиксируют их в 10%-ном формалине, ацетоне или жидкости Адуцкевича следующего состава: 80%-ной уксусной кислоты — 1 часть, хлороформа —2 части, 96° этилового спирта — б частей.

Продолжительность фиксации при комнатной температуре в формалине 1 сут, в ацетоне и жидкости Адуцкевича — 3—6 ч. После фиксации вырезают кусочки толщиной не более 1 —1,5 мм, заливают в парафин, после чего готовят гистологические срезы, высушивают и окрашивают.

Окраску по Туревичу производят следующим образом.

1. Срезы перед окраской депарафинируют в ксилоле 10—20 мин.

2. Смывают спиртом.

3. Окрашивают ядра клеток гематоксилином Вейгерта в течение 2 мин.

4. Срезы промывают водой.

5. Дополнительно окрашивают 1 %-ным раствором кислого фуксина в течение 1 мин.

6. Промывают водой.

7. Дифференцируют в смеси 95° спирта и насыщенного водного раствора пикриновой кислоты в течение 10—20 с до ясно-желтого оттенка.

8. Высушивают фильтровальной бумагой.

9. Обезвоживают абсолютным спиртом.

10. Просветляют в ксилоле в течение 1 мин.

11. Заключают в канадский, или пихтовый, бальзам.