Получение накопительной культуры азотфиксаторов

Для накопления свободноживущих азотфиксаторов используют среду Эшби, не содержащую минеральных и органических источников азота, следующего состава: (г/л): маннит — 20,0; К₂НРО₄ — 0,2; MgS04 — 02; NaCl — 0,2; K2SO4 — 0,1; СаСОз — 5,0; агар — 20,0; рН 7,1—7,3. Среду разливают в пробирки,стерилизуют при 0,5 ати и готовят скошенный агар. Посев проводят штрихом. Продолжительность культивирования — 7—10 суток. Инкубируют при температуре 28-30^о С. Через 5-7 суток на поверхности среды образуется жирная пленка, сначала серовато-белая, а затем постепенно буреющая. Микроскопируя пленку, можно обнаружить клетки азотфиксирующих бактерий. Необходимо отметить, что на среде Эшби могут расти не только микроорганизмы, фиксирующие молекулярный азот, но и олиго-нитрофилы, т. е. микроорганизмы, способные усваивать ничтожные количества связанного азота, содержащегося в реактивах, воде и воздухе. Обильный рост на среде Эшби может свидетельствовать о принадлежности бактерий к азотфиксаторам.

Среды для культивирования азотфиксирующих клубеньковых бактерий разработаны немецким ботаником Бейеринком в 1980 годы. Для культивирования клубеньковых бактерий он употребил отвар листьев и корней бобовых растений, содержащий 0,25% аспарагина, 0,5% глюкозы и 7% желатина. Этот новый принцип культивирования бактерий, основанный на стимуляции их развития ростовыми веществами, дал блестящие результаты.

Молекулярный азот могут фиксировать и анаэробные бактерии. Для выявления этой способности у представителей рода Clostridium используют среду следующего состава (г/л): дрожжевой экстракт — 0,015; глюкоза — 20,0; К2НРО4 — 11,0. MgS04 х 7Н20 — 0,5; NaCl, MTIS04 и FeS04 — следы (по 1 мл 1%-ного раствора каждой соли); СаСОз — 20,0; рН 7,0. Среду разливают в высокие пробирки и стерилизуют при 0,5 ати. После стерилизации пробирки доливают почти до пробки стерильной средой и прогревают на кипящей водяной бане в течение 20—30 мин для удаления растворенного в среде кислорода. Затем среду в пробирках быстро охлаждают под струей холодной воды и проводят посев суспензией микроорганизмов. Посевной материал вносят пипеткой на дно пробирки. Продолжительность культивирования — 2—7 суток. По окончании опыта отмечают рост азотфиксаторов (помутнение среды, образование газа, появление запаха масляной кислоты) или его отсутствие.