Рост бактерий с равномерным помутнением среды

2. Придонный рост бактерийхарактеризуется обра­зованием осадка на дне пробирки с жидкой питательной сре­дой. Осадок может быть скудным или обильным, крошковидным, гомогенным, волокнистым или в виде крупных рыхлых хлопьев.

3. Пристеночный рост бактерий выражается в том, что питательная среда, находящаяся в пробирке, остается совершенно прозрачной. Бактерии растут, образуя более или менее крупные рыхлые хлопья к внутренней поверхности стенок сосуда.

4. Поверхностный рост бактерий характеризуется появлением на поверхности жидкой питательной среды пленки.

Рост на полужидкой питательной среде.Для выявления особенностей микробного роста на полужидкой питательной среде исследуемую культуру засевают в столбик 0,2—0,5% полужидкого агара.

Подвижные микробы в столбике полужидкого агара вы­зывают выраженное помутнение, распространяющееся более или менее равномерно по всей толщине среды.

Неподвижные формы микробов растут только по ходу прокола среды.

Ферменты бактерийпринадлежат к 6 классам: оксиредуктазы, трансферазы, гидролазы, лигазы, лиазы, изомеразы. Также они подразделяются на экзоферменты - ферменты, которые выделяются в окружающую среду и эндоферменты – ферменты, которые образуются бактериальной клеткой и локализуются внутри нее.

Сахаролитические ферментымикробов расщеп­ляют углеводы и высокоатомные спирты, которые принято объединять в одну группу, именуемую сахарами, присуще многим патогенным микробам. Под действием сахаролитических ферментов бактерий сахара расщепляются на альдегиды и кислоты. Конечными продуктами их расщепления явля­ются газообразные вещества: СО₂ и Н₂.

Характерно, что различные виды и даже разновидности микробовотносятся по-разному кодним и тем же сахарам. Так, например, одни бактерии, ферментируя лактозу, оста­ются нейтральными в отношении глюкозы, другие, наоборот, сбраживают глюкозу, а третьи, наиболее активные, вызыва­ют расщепление и глюкозы, и лактозы.

Для обнаружения сахаролитических ферментов исследуе­мую культуру бактерий засевают в питательные среды Гисса, называемые также «пестрым» рядом. Название «пестрый» ряд обусловлено тем, что под дей­ствием ферментов микроба одни углеводы остаются неизменными и, следовательно, цвет питательной среды не меняетя, в то время как другие сахара расщепляются, образуя кислые продукты распада, которые изменяют цвет индикатора и соответственно цвет питательной среды. Среды Гиса бывают жидкими и полужидкими. В пробирки с жидкими средами Гиса для обнаружения газов, являющихся конечными продуктами распада сахаров, опускают «поплавок» - труппочку диаметром 0,5-0,7 см, запаянную с одного конца. «Поплавок» помещают запаянным концом кверху. При образовании в среде газообразных продуктов они вытесняют часть жидкости, находящейся в «поплавке», вследствие чего у запаянного конца его собирается воздушный пузырек. В полужидких средах Гиса газообразование определяют по наличию мелких пузырьков газа в толще среды и стойкой пены на ее поверхности.Пробирки с набором сред Гисса ставят в штатив в один ряд. На каждой пробирке надписывают название сахара, со­держащегося в среде. На первой пробирке каждого ряда, кроме названия сахара, указывают номер или вид исследуе­мой микробной культуры. Культуру берут на кончик петли в очень небольшом количестве и засевают по общепринятой методике.

Таким образом, при изучении сахаролитических ферментов, выделяемых микробами, учитывают не только явления расщепления тех или иных сахаров по кислотообразованию, но и глубину ферментативного процесса по наличию в питательной среде конечных газообразных продуктов.

Протеолитические ферменты микробов.Для выявления протеолитических ферментов исследуемую культуру микроба засевают в питательную среду, содержа­щую тот или иной белок. Чаще всего для этой цели приме­няют желатин, реже — свернутую лошадиную сыворотку, коа­гулированный яичный белок, молоко или кусочки вареного мяса. Протеолитически активные культуры микробов, например под действием фермента желатиназы разжижают желатин. Некоторые виды патогенных микробов обладают способностью расщеплять белок и пептон до продуктов глубокого распада: индола, сероводорода, мочевины, аммиака.

Определение индола в культуре микроор­ганизмов. Индол образуется при расщеплении сложной гетероциклической кислоты — триптофана. Для выявления индолообразования петлю исследуемой культуры засевают в нейтральный бульон. Тотчас после посева в пробирку вносят полоску индикаторной бумаги, пропитанную раствором щавелевой кислоты, так, чтобы индикаторная бумага не касалась питательной среды. Для этого верхнюю треть бумажной полоски прижимают пробкой к стенке пробирки. Посевы инкубируют 24—48 ч при темпера­туре 37 °С. Образование индола определяют по окрашиванию нижнего конца индикаторной бумаги в бледно-розовый цвет, хорошо заметный в проходящем свете.

Определение сероводорода. Сероводород яв­ляется конечным продуктом расщепления аминокислот: цистина, цистеина и метионина, содержащих серу. Образование сероводорода хорошо заметно на трехсахарной питательной среде Клиглера или Олькеницкого в виде черного цвета.

Окислительно-восстановительные ферменты. В культуре микробов могут быть обнаружены окисли­тельно-восстановительные ферменты, связанные главным об­разом с дыхательной функцией микроорганизма (оксидаз и дегидраз).

Определение фермента каталазы. Некоторые виды микроорганизмов, принадлежащие к группе аэробов, в процессе дыхания образуют перекись водорода, являющую­ся клеточным ядом. Количество перекиси водорода в культуре никогда не достигает высоких концентраций, так как по ме­ре образования перекись расщепляется на воду и молекуляр­ный кислород при участии фермента каталазы. На поверх­ность микробной культуры, выращенной на плотной пита­тельной среде в чашке Петри, наносят 1—2 мл 1% раствора перекиси водорода так, чтобы она покрывала поверхность культуры тонким слоем. Появление пузырьков газа в слое, нанесенной жидкости свидетельствует об образовании кислорода в результате расщепления перекиси водорода под действием каталазы. Подобный результат отмечается как положительный результат реакции на каталазу.