Концентрирование и высушивание биопрепаратов

В культуральной жидкости после окончания процесса ферментации содержатся микроорганизмы, продукты их жизнедеятельности, остатки питательной среды, пеногаситель, растворимые и нерастворимые ве­щества. Целевым продуктом биосинтеза могут быть непосредственно сами микроорганизмы, либо их метаболиты, растворенные в культу­ральной жидкости или находящиеся внутри клеток микроорганизмов.

Почти во всех случаях для получения целевого продукта необходи­мо отделить взвешенную фазу - массу микроорганизмов от культу­ральной жидкости.

Культуральные жидкости обычно являются сложными смесями и содержат большое число компонентов, многие из которых обладают близкими физико-химическими свойствами.

Наряду с растворенными минеральными солями, углеводами, бел­ками и другими органическими веществами культуральные жидкости содержат в значительном количестве полидисперсные коллоидные частицы и взвеси. Следовательно, они являются не только многоком­понентными растворами, но и суспензиями. Дисперсная фаза этих сус­пензий состоит из мицелия или клеток микроорганизмов, а также из твердых частиц, содержащихся во многих питательных средах - муки, хлопьев из кукурузного экстракта и т.п. Содержание микроорганизмов в культуральной жидкости, как правило, очень низкое. В 1 л содержит­ся обычно 5-10 г сухой биомассы. Отделение такого количества взве­шенной фазы-трудная технологическая задача, которую приходится решать путем концентрирования биомассы различными способами (флотирование, сепарирование, упаривание).

В производственных условиях приходится затрачивать значитель­ное количество энергии на обработку больших объемов труднофильт-руемых суспензий.

Способы отделения клеточной биомассы микроорганизмов от куль­туральной жидкости можно разделить на:

- механические (отстаивание, фильтрование, центрифугирование)

- теплотехнические (сушка).

В зависимости от конечной цели выбирают различные сочетания этих способов. При выборе схемы концентрирования и извлечения биомассы проводят предварительную экономическую оценку выбран­ного способа с учетом товарной формы биопрепаратов, концентрации микроорганизмов в культуральной жидкости и др.

Большинство целевых продуктов микробиологического синтеза не­стабильны и подвержены влиянию различных факторов. Белки, напри­мер, исключительно чувствительны к нагреванию, изменению рН сре­ды, к многим физическим и химическим воздействиям.

Очень часто выделить целевой продукт с помощью одного метода практически невозможно. Поэтому применяют комбинацию несколь­ких методов.

 

1.МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ И КОНЦЕНТРИРОВАНИЯ ПРОДУКТОВ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО СИНТЕЗА

 

При выборе метода выделения и концентрирования того или иного продукта микробиологического синтеза необходимо учитывать сле­дующие факторы:

1. Физико-химические свойства культуральной жидкости.

2. Свойства выделяемого продукта (термолабильность, стойкость к различным химическим агентам и др.).

3. Требования к конечной форме продукта (степень чистоты и сте­пень концентрирования).

4. Технологические и технико-экономические показатели (выход продукта, производительность оборудования, необходимость даль­нейшей обработки и др.).

Все методы выделения продуктов микробиологического синтеза из культуральной жидкости делят на две группы:

1. Экстракция, ионный обмен, адсорбция, кристаллизация - если целевой продукт в растворе.

2. Осаждение, фильтрование, центрифугирование, сепарирование -если целевой продукт в виде твердой фазы.

Часто невозможно выделить целевой продукт с помощью одного метода, тогда применяют комбинацию нескольких методов и в процес­се выделения переводят продукт из растворимой формы в нераствори­мую (или наоборот). Как правило, при выделении растворенных ве­ществ культуральную жидкость приходится подвергать предваритель­ной обработке и очистке с помощью осаждения, фильтрования, центрифугирования, сепарирования и мембранных методов (электродиа­лиз, ультра- и микрофильтрация).

 

1.1. ОСАЖДЕНИЕ

Осаждение (седиментация) - это процесс расслоения дисперсных систем под действием силы тяжести и отделение дисперсной фазы в виде осадка.

Простейший случай седиментации - отстаивание применяют в следующих случаях:

1. При диаметре частиц более 3 мкм, когда броуновское движение не оказывает существенного влияния на процесс отстаивания.

2. При выделении стабильных продуктов, когда фактор времени не имеет решающего значения.

3. При более низких, чем при других методах, затратах.

4. В особых случаях, когда необходимо разделить частицы на фракции по размеру или плотности на основании их различных скоро­стей осаждения.

5. Если необходимо предварительно разделить суспензию на две фракции - осадок и надосадочную жидкость, которые в дальнейшем можно обрабатывать на различном оборудовании.

Скорость осаждения биомассы из культуральной жидкости невели­ка и составляет порядка 10-6 – 10-7 м/с.

Для ускорения процесса осаждения применяют:

1. Коагулянты - вещества, переводящие взвешенные частицы в агрегатно-неустойчивое состояние.

2. Флокулянты - вещества, способствующие разрушению колло­идных структур и образованию крупных хлопьев.

В качестве коагулянтов применяют обычно желатин, рыбный клей, казеин, в качестве флокулятов - метилцеллюлозу, пектин, альгинат натрия и др.

 

1.2. ЦЕНТРИФУГИРОВАНИЕ

Центрифугирование - это разделение неоднородных систем под воздействием поля центробежных сил.

Для центрифугирования применяют центрифуги различных конст­рукций.

Центрифуги, имеющие высокий фактор разделения и оснащенные тарельчатым барабаном называют сепараторами. В микробиологиче­ской промышленности сепараторы являются одним из самых распро­страненных типов центрифуг. Сепараторы позволяют сконцентриро­вать осадок до влажности 60-90%.

В последние годы появились специальные герметичные сепарато­ры, позволяющие вести процесс сепарирования в автоматизированном режиме, оптимально подобранном для специфических условий кон­кретных культуральных жидкостей.

Области применения центрифугирования:

1. Выделение биомассы из культуральной жидкости (дрожжи, бак­терии, грибы).

2. Отделение различных целевых продуктов микробиологического синтеза (антибиотики, ферменты, витамины и др.), переведенных предварительно в твердую фазу.

3. Разделение эмульсий, образующихся при экстракции.

Недостатки центрифугирования:

1. Сложность конструкции, высокая энергоемкость и стоимость.

2. Сложность эксплуатации (ненадежность, вибрация, шум, необ­ходимость периодической разборки и мойки).

3. Воздействие на клетку центробежной силы, нагрев, трудность герметизации и обеспечения асептических условий ведения процесса.

Главные достоинства центрифугирования и сепарирования - вы­сокая производительность и высокая степень концентрирования - по­зволяют успешно конкурировать с другими способами выделения и концентрирования как в промышленных, так и в лабораторных услови­ях.

 

1.3. ФИЛЬТРОВАНИЕ

Фильтрование - это разделение твердой и жидкой фаз суспензии при пропускании ее через пористую перегородку.

Конечная цель фильтрования - получение твердой или жидкой фа­зы (когда одна из них является отходом), а также одновременное полу­чение твердой и жидкой фаз.

Фильтрование - гидродинамический процесс, скорость которого прямо пропорциональна разности давлений, создаваемой по обеим сторонам фильтровальной перегородки и обратно пропорциональна сопротивлению, испытываемому жидкостью при ее движении через поры перегородки и слой образовавшегося осадка.

На процесс фильтрования влияет ряд факторов, которые можно разделить на две группы:

1. Макрофакторы - разность давлений, толщина слоя осадка, вяз­кость жидкой фазы и др. Эти факторы заведомо известны и контроли­руются с помощью приборов.

2. Микрофакторы - размер и форма частиц осадка и пор фильтро­вальной перегородки, толщина двойного электрического слоя на по­верхности частиц и др. Эти факторы менее изучены и их характеризу­ют лишь косвенными методами. Именно микрофакторы оказывают решающее влияние на процесс фильтрования и затрудняют его мас­штабирование.

При фильтровании культуральной жидкости образуются большей частью студенистые хлопьевидные или мелкозернистые осадки, обла­дающие большим сопротивлением. Средняя скорость фильтрации при этом составляет всего 50 л/м2 в час.

Для увеличения скорости фильтрования обычно используют два приема:

1. Предварительная обработка суспензий.

2. Применение вспомогательных фильтровальных материалов. Предварительная обработка культуральной жидкости позволяет бо­лее полно перевести целевой продукт в жидкую или твердую фазу, обеспечить лучшее разделение фаз и получить продукт, годный для дальнейшей очистки и выделения. В результате предварительной об­работки происходит коагуляция взвешенных частиц.

Наиболее распространены следующие способы предварительной обработки:

1. Кислотная коагуляция (применяется для выделения антибиоти­ков, стойких к низким рН).

2. Обработка электролитами.

3. Тепловая коагуляция (возможна в тех случаях, когда продукт стоек к нагреванию до 70-80°С).

4. Образование наполнителей при добавлении химических агентов. В качестве вспомогательных фильтровальных материалов исполь­зуются фильтровальные порошки, которые вносят в фильтруемую жидкость как наполнители или предварительно наносят на рабочую поверхность фильтра в виде грунтового слоя.

 

1.4. ЭКСТРАКЦИЯ

Экстракция — процесс разделения смеси твердых и жидких ве­ществ с помощью избирательных (селективных) растворителей (экст-рагентов).

Физическая сущность экстракции состоит в переходе извлекаемого компонента их одной фазы (жидкой или твердой) в фазу жидкого экст-рагента при их взаимном соприкосновении. Экстрагируемые компо­ненты переходят из исходного раствора в растворитель вследствие разности концентраций, поэтому данный процесс относится к числу диффузионных.

Процесс экстракции проводится обычно в двухфазных системах:

«твердое тело-жидкость» или «жидкость-жидкость».

Область применения экстракции: выделение и очистка антибиоти­ков, витаминов и аминокислот.

Преимущества метода:

1. Низкие затраты.

2. Высокая скорость экстракционных процессов.

Недостаток метода: использование вредных, взрывоопас­ных органических растворителей.

 

1.5. ИОНООБМЕН

Ионообмен представляет собой сорбционный процесс.

Адсорбция - это процесс поглощения одного или нескольких ком­понентов целевого продукта из газовой смеси или раствора твердым веществом – адсорбентом.

Процессы адсорбции (как и другие процессы массопередачи) изби­рательны и обычно обратимы. Благодаря этому становится возможным выделение поглощенных веществ из адсорбента, т.е. проведение про­цесса десорбции,

Первые сорбционные методы выделения и очистки биологически активных веществ и антибиотиков были основаны на применении мо­лекулярных сорбентов (активированные угли, окись алюминия и др.). Молекулярные сорбенты которые одинаково хорошо сорбируют выде­ляемое вещество и ряд примесей.

В настоящее время разработаны ионообменные сорбенты (иониты), которые характеризуются различной избирательностью и высокой специфичностью.

Иониты - это органические и неорганические вещества, практиче­ски нерастворимые в воде и обычных растворителях, которые содер­жат активные (ионогенные) группы с подвижными ионами, способные обменивать эти ионы на ионы электролитов при контакте с их раство­рами.

Наиболее перспективны синтетические ионообменные смолы (КУ-2, КБ-4, КБ-ЧП-2, КМД, АВ-17, ЭДЭ-10 и др.).

В зависимости от наличия ионогенных групп иониты можно разде­лить на 2 основных класса:

1. Ионообменные сорбенты, содержащие кислотные группы - катиониты (нерастворимые кислоты).

2. Ионообменные сорбенты, содержащие основные группы - анио-ниты (нерастворимые основания).

Иониты нашли широкое применение в технологии производства антибиотиков на этапе их сорбции из культуральной жидкости.

 

1.6. КРИСТАЛЛИЗАЦИЯ

Кристаллизация - это выделение твердой фазы в виде кристаллов, главным образом, из растворов и расплавов.

Кристаллизация антибиотиков и других биологически активных веществ основана на резком уменьшении их растворимости в результа­те изменения температуры раствора (обычно понижения, но иногда, например, в случае эритромицина - повышения) или перевода их в другую плохо растворимую химическую форму. Последнее достигает­ся изменением рН раствора или добавлением соответствующего реа­гента, часто с одновременным снижением температуры.

Кристаллизация является не только способом получения антибио­тиков в твердом виде, но и очень эффективным средством очистки от сопутствующих примесей, что является существенным преимуществом по сравнению с некоторыми другими методами разделения.

Метод кристаллизации нашел применение в технологии получения антибиотиков (тетрациклина, эритромицина и др.), витаминов, полисахаридов.

 

1.7. УПАРИВАНИЕ

Упаривание - это процесс концентрирования жидких растворов путем частичного удаления растворителя испарением при нагревании жидкости. В ряде случаев упаренный раствор подвергают последую­щей кристаллизации.

Концентрированные растворы и твердые вещества, получаемые в результате упаривания, легче и дешевле перерабатывать, хранить и транспортировать.

Обычно упаривание в производстве антибиотиков осуществляют при температуре 60-70°С под вакуумом, поэтому данный метод недо­пустим при переработке термолабильных биологически активных ве­ществ.

 








Дата добавления: 2016-05-11; просмотров: 7276;


Поиск по сайту:

При помощи поиска вы сможете найти нужную вам информацию.

Поделитесь с друзьями:

Если вам перенёс пользу информационный материал, или помог в учебе – поделитесь этим сайтом с друзьями и знакомыми.
helpiks.org - Хелпикс.Орг - 2014-2024 год. Материал сайта представляется для ознакомительного и учебного использования. | Поддержка
Генерация страницы за: 0.022 сек.