Генная инженерия растений
Перед учеными встала новая задача - как ввести интересующие нас гены в растительную клетку, тем самым получить растения с необходимыми признаками и свойствами. С этой целью были использованы клетки корончатых галлов - опухолей растений, образующихся на прикорневой части стебля у корневой шейки (отсюда название - корончатый), на подземных (яблоня) и надземных (виноград) частях растений, у прививок в месте стыка привоя с подвоем. Корончатые галлы - настоящая злокачественная опухоль. Их клетки способны распространяться по растению от первичного очага и давать начало вторичным опухолям - метастазам. Болезнь поражает свыше 600 видов преимущественно двудольных растений. Возбудителем болезни оказалась бактерия, выделенная из опухоли винограда в 1897 г. – Аgrobacteriumtumefaciens(Pseudomonadaceae).С этой бактерией связано рождение и становление генной инженерии растений. Если этой бактерией, часто встречающейся в ризосфере, заразить здоровое, не пораненное растение, то в области раны разовьется типичный корончатый галл. Опухолевые клетки растут в культуре быстро, без добавления фитогормонов. Для возникновения опухоли достаточно кратковременного контакта с бактерией, само ее развитие происходит в отсутствии бактерии. Под воздействием бактерии нормальные клетки превращаются в опухолевые, но как это происходит, долго не удавалось выяснить. В 1974 г. было установлено, что патогенные штаммы агробактерии содержат крупную плазмиду (150-200 тыс. пар нуклеотидов), отсутствующую у бактерий патогенных штаммов. Теряют плазмиду при температуре более 30°С.Иными словами, фактор, вызывающий образование опухоли, связан у агробактерии с крупными плазмидами. В индуцированных с помощью плазмид опухолях происходит синтез опинов(производных аминокислот, в частности аргинина), использующихся бактериями для питания. Этот механизм осуществляется посредством переноса плазмидных генов, ответственных за синтез опинов,от бактерий к растениям и их последующее существование и проявление в растении без бактерий. Эти гены были выявлены в плазмидах и в опухолевых растительных клетках бактерии. Попадая на ранку подходящего растения, начинают в течение двух часов активно синтезировать целлюлозу, играющую роль связующего жгута. Еще через 4 часа начинается перенос плазмиды из бактерии в клетки растения. Заканчивается он через 2 часа. Теперь присутствие бактерий становится необязательным для развития опухолей. Онкогены плазмиды встраиваются в растительное ядро, что ведет к опухолевой трансформации клетки. Встраивание происходит с помощью обратного действия матричной РНК. Плазмидные онкогены кодируют также синтез фитогормонов (ауксинов, цитокининов), способствующих росту и делению опухолевых клеток.
Гены, которые хотят перенести в растения, вшивают в векторы плазмид Е.сoli,затем гибридные ДНК переносят в агробактерии, а из них в растения. Предназначенный для переноса ген вшивают в участок плазмиды агробактерии,способный внедряться в ядро растительной клетки. Для переноса генов используют также вирусы растений, в частности вирус цветной мозаики капусты. Ряд генов вируса, несущественных для его жизнедеятельности, заменяются на другие гены.
Дата добавления: 2016-03-27; просмотров: 1182;