Особенности лабораторной диагностики туляремии
2. Бактериоскопия
3. Серологические исследования
4. Проба с тулярином
5. Биологический метод
1.Организм человека восприимчив к туляремии.У человека туляремия — лихорадочное заболевание с относительно доброкачественным течением, не представляющее опасности заражения для окружающих. Летальность при туляремии в России ниже 0,5% (без лечения). Для диагностики туляремии у больного вполне достаточно применения 2 реакций, кожной пробы и реакции агглютинации. Другие иммунологические реакции технически более сложны (например, реакция связывания комплемента).
Выделение от больного культуры возбудителя доступно лишь специально оснащенным лабораториям и применяется в основном с исследовательскими целями. Для обнаружения туля-ремийных бактерий в органах животных и объектах внешней среды в лабораторной практике чаще всего используют бактериологические методы исследования материала. Грызунов, кровососущих членистоногих доставляют в лабораторию для исследования с соблюдением предосторожностей, предусмотренных правилами работы с особо опасными инфекциями.
Бактериологический метод для диагностики заболевания у человека по сравнению с биологическим методом малоэффективен, так как в организме больного человека туляремийные микробы содержатся в скудном количестве. Для выращивания туляремийных бактерий используют специальные среды, так как на простых питательных средах (мясо-пептонном агаре, бульоне) этот микроб не растет, обычно применяется свернутая желточная среда, рыбно-глюкозо-цистиновый агар и агар с добавлением крови. При массивном обсеменении органов рост культуры туляремийных бактерий появляется через 18—24 ч в виде нежного синего налета на поверхности среды.
2. Бактериоскопия: ввиду очень мелких размеров туляремийного микроба он может быть с достоверностью обнаружен в мазках-отпечатках из патологического материала только при обильном обсеменении последнего. При изготовлении мазков-отпечатков используют окраску по Романовскому-Гимзе. Путем бактериоскопии (в сочетании с реакцией преципитации) может быть получен быстрый (через 2—3 ч) положительный ответ при исследовании доставленных грызунов. Однако он является лишь предварительным, так как положительные результаты бакте-риоскопического исследования должны быть подтверждены выделением культуры.
3. Серологические исследования: из серологических методов исследования применяют реакцию агглютинации по общепринятой методике с использованием туляремийного диагноста. Диагностическим считается титр 1 : 100 и выше. Более чувствительной является реакция непрямой гемагглютинации, применяемая как для ранней, так и для ретроспективной диагностики. В качестве антигена используют туляремийный эритроцитарный диагностикум.
Ускоренный метод серологической диагностики туляремии. Для той цели применяют кровяно-капельную реакцию на стекле. В качестве антигена используют обычный туляремийный диагностикум. В положительных случаях при наличии у больного титра сыворотки 1 : 100 и выше агглютинация на стекле наступает немедленно после смешения крови с антигеном. Для ускоренной диагностики туляремии у людей может быть использована также микросерореакция. Для ее постановки на предметное стекло наносят не каплю крови, а каплю сыворотки крови обследуемого больного и к ней добавляют столько же антигена. Положительная микрореакция на стекле может служить для предварительной ориентации в диагнозе.
4. Аллергическая реакция строго специфична, у больных туляремией людей она становится положительной при всех химических формах туляремии и, как правило, опережает реакцию агглютинации. Проба состоит во введении внутрикожно в область предплечья, передней поверхности 0,1 мл тулярина (взвесь убитых туляремийных микробов). Оценку пробы производят через 24, 48 и 72 ч. Проба является положительной при появлении отека или инфильтрата. Гиперемия без отека, исчезающая через сутки, диагностического значения неимеет. Внутрикож-ную пробу применяют и для ретроспективной диагностики туляремии. Надо иметь в виду, что проба с тулярином бывает положительной у лиц, подвергшихся прививкам туляремийной вакциной. Вместо внутрикожной пробы пользуются накожной пробой: нанесением двух капель антигена на ладонную поверхность предплечья с последующими поверхностными насечками и легким втиранием антигена. В положительных случаях через 24—36 ч появляются гиперемия и отечность, сохраняющиеся 2—3 дня.
5. Биологический метод является самым чувствительным способом обнаружения туляремийных бактерий в любом исследуемом материале. Биологический метод исследования заключается в заражении лабораторных животных (морская свинка, белая мышь) результатом бубонов, взятым до 14—20-го дня болезни; соскобом со дна язвы, смешанным с физиологическим раствором, полученным до 8—12-го дня, отделяемым конъюнктивы, взятым до 15—17-го дня болезни; кровью 5—6 мл, взятой до 6-го дня болезни. Исследуемый материал вводят подопытным животным подкожно или внугрибрюшно. Зараженные животные погибают от туляремии в течение 4—14 дней. Кусочки печени, селезенки, лимфатического узла и кровь засевают на желточную среду для выделения возбудителя.
Вопрос 68.Стафилококковые инфекции наружных покровов
1. Биология, культуральные свойства стафилококков
2. Антигенное строение; серотины; фаготипы
3. Лабораторная диагностика стафилококковых инфекций
1.филококки широко распространены в природе и являются возбудителями многих заболеваний человека и животных, весьма различных по своим проявлениям, от легких местных фолликулитов до стафилококкового сепсиса. Наиболее часто стафилококковые заболевания возникают у рожениц и новорожденных в родильных домах (сепсис, маститы, пиодермия и пневмония у новорожденных). Большинство заболеваний стафилококковой этиологии возникают в результате заражения патогенными стафилококками, устойчивыми к антибиотикам.
Биология стафилококков, культуральные свойства: для выращивания, избирательного выделения и дифференцирования стафилококков существует ряд сред. Корреляцию между биохимическими и культуральными свойствами стафилококков и их патогенностью можно установить при выращивании на среде, содержащей водный 1,5%-ный агар, хлористый натрий, магний, дрожжевой экстракт, желатин, двузамещенный фосфорнокислый калий.
Биохимические свойства: стафилококки ферментируют лактозу и маннит, поэтому исследуемый материал засевают на плотные или жидкие среды (агар) с добавлением лактозы и маннита. Патогенные стафилококки при выращивании при 37 "С в течение 18 ч разлагают углеводы, и индикатор изменяет цвет среды. Однако значительное число штаммов непатогенных стафилококков (от 11 до 55%) также способно ферментировать маннит, что не позволяет признать эту пробу достаточным критерием патогенности. Кроме того, в связи с выделением штаммов стафилококков, резистентных к действию антибиотиков, их способность ферментировать маннит значительно изменилась.
Существует ряд других методик идентификации и дифференцирования стафилококков.Нахождение фосфатазы в культурах на чашках с питательной средой рекомендовано для исключения евирулентных штаммов, в частности культур, выделяемых из носа от возможных носителей патогенных стафилококков. Для этой цели применяют агаровую среду, включающую фенолфталеиндифосфат. Микробы, продуцирующие фосфатазу, освобождают свободный фенолфталеин, который затем обнаруживается при помещении чашки с культурой в пары аммония.
Образование токсинов. Связь гемолитической способности стафилококка с его патогенностью позволяет считать гемолиз достаточным критерием патогенности. Для практических целей имеет значение определение гемолитической функции стафилококковых L- и В-токсинов. При посеве патогенных штаммов стафилококков, выделяющих А-гемолизин при выращивании при 37 °С на чашках с агаром, содержащих эритроциты барана, вокруг колоний обнаруживают значительные зоны гемолиза, В-гемолизин лизирует эритроциты барана, но при условии, что после выращивания при 37 °С посевы будут помещены на 24 ч щ холод. В связи с указанным свойством В-гемолизин получил название тепло-холодового гемолизина.
2.Патогенные и непатогенные стафилококки могут быть также дифференцированы с помощью реакции адсорбции. С помощью адсорбированных сывороток пиогенные стафилококки были разделены на 7 специфических типов и 8 типов с менее специфическими реакциями. Большое значение имеет метод фаго-типажа стафилококков. С помощью специфических стафилококковых фагов стафилококки отнесены к различным фаготипам.
Метод фаготипирования позволяет выявить патогенность штаммов стафилококка. Для фагодиагностики стафилококков с помощью специфического фага применяются фаги, принадлежащие к 5 группам. Основными фагами удается пикетировать до 60% выделяемых бактерий, процент пикетируемых фагами стафилококков достигает 73,7%.
По степени патогенности и токсичности стафилококки могут быть разделены на 3 группы:
• стафилококки 1-й группы дают значительный гемолиз на 5%-ном кровяном агаре с кровью кролика и барана в течение 1—2 ч. Стафилококков этой группы выделяют при фурункулезе, гид-раденитах, остеомиелитах, флегмонах, сепсисе и при ряде других гнойных заболеваний. Стафилококки, принадлежащие к первой группе, считаются патогенными;
• стафилококки 2-й группы вызывают незначительный гемолиз на 5%-ном кровяном агаре с кровью кролика и барана. Считаются условно патогенными. Встречаются часто на открытых поверхностях кожи, при фолликулитах, иногда на поверхности ран;
• стафилококки 3-й группы не вызывают гемолиза на 5%-ном кровяном агаре с кровью кролика или барана. Эти стафилококки следует считать сапрофитами, их часто выделяют с поверхности здоровой кожи, а также с различных предметов.
3. Стафилококки относительно легко выделяются из очагов поражения у человека, и нет необходимости прибегать к методу обогащения.
При стафилококковой пневмонии стафилококки чаще всего выделяются в чистой культуре. Для выделения стафилококков производят посев на чашку Петри с молочно-солевым агаром. Одновременно засевают чашки с 5%-ном кровяным агаром с кровью кролика или барана. Через 18—20 ч инкубации при 37 °С выросшие на чашках колонии микроскопируют, делают мазок и окрашивают по Граму. Колонии стафилококков затем пересевают на пробирки с питательной средой и помещают в термостат при 37 "С. Через 12—18 ч роста после микроскопи-рования мазков из выросшей культуры, окрашенных по Граму, ставят реакцию плазмокоагуляции, а из оставшейся культуры готовят взвесь и вводят кролику внутрикожно. Реакцию учитывают через 24—48 ч (появление некроза).
Вопрос 69.Возбудитель рожи
Дата добавления: 2016-02-02; просмотров: 1208;