Эмбриональная стволовая клетка

Из бластоцисты на 4–5 сутки развития методом иммунохирургии (при помощи антител, вызывающих повреждение клеток трофобласта) внутреннюю клеточную массу отделяют от трофэктодермы (рис. 4-2). Полученные клетки культивируют in vitro, с целью выделения чистой клеточной линии, способной формировать шарообразные скопления — эмбриоидные тела. С помощью специфических факторов роста можно направлять дифференцировку диссоциированных клеток эмбриоидных тел. Фактор роста гепатоцитов (HGF) и фактор роста нервов (NGF) стимулируют дифференцировку клеток всех трёх зародышевых листков. Ретиноевая кислота, фактор роста эпидермиса (EGF), морфогенетический белок кости 4 (BMP4) и щелочной фактор роста фибробластов (bFGF) индуцируют дифференцировку клеток, образующихся из эктодермы. Производные мезодермы можно получить путём воздействия на стволовые клетки трансформирующим фактором роста 1 (TGF1) и активином-А.

Рис. 4-2. Получение эмбриональных стволовых клеток. Оплодотворённую in vitro яйцеклетку культивируют до стадии бластоцисты, образованной примерно 200–250 клетками, 30–34 из которых относятся к внутренней клеточной массе. Далее методом иммунохирургии трофэктодерму отделяют от внутренней клеточной массы. Полученные клетки выращивают на подложке из облучённых фибробластов эмбрионов мыши в культуральной среде, содержащей бычью сыворотку. Через серию многократных пассажей размножающихся клеток получают чистые клеточные линии, способные формировать шарообразные структуры — эмбриоидные тела. [143]