Практическая часть. Подготовка к стерилизации лабораторной посуды

Подготовка к стерилизации лабораторной посуды

1. Перед стерилизацией лабораторную посуду тщательно моют и сушат.

2. Пробирки, флаконы, бутыли, матрацы, колбы закрывают ватно-марлевыми пробками. Поверх пробки на каждый сосуд (кроме пробирок) надевают бумажный колпачок.

3. Чашки Петри стерилизуют завернутыми в бумагу по 1— 5 штук или в пеналах.

4. Пастеровские пипетки по 3—5—10—15 штук заворачивают в плотную оберточную бумагу. В верхнюю часть каждой пипетки вкладывают кусочек ваты. Во время работы пипетки из пакета вынимают за верхний конец.

Лабораторную посуду стерилизуют:

а) сухим жаром при температуре 150, 160 и 180°С соответственно 2 часа, 1 час и 30 минут.

б) в автоклаве при давлении 1 атм. в течение 20—30 минут.

Стерилизация металлических инструментов

Ножницы, скальпели, пинцеты и пр. стерилизуют в 2% содовом растворе (сода предупреждает появление ржавчины и потерю остроты). Лезвия скальпелей и ножниц перед погружением в воду рекомендуется обертывать ватой.

Стерилизация перчаток и других резиновых изделий

Перчатки, шланги, трубки и другие, загрязненные вегетативной формой микробов, стерилизуют кипячением в 2% растворе соды или текучим паром 30 минут; при загрязнении спороносной патогенной микрофлорой — в автоклаве при давлении 1 атм. в течение 30 минут.

Приготовление дезрастворов группы хлора

1. Хлорная известь обладает высоким бактериальным действием. Ее используют в микробиологической практике в виде порошка, 10—20% хлорно-известкового молока и 0,2—10% осветленного раствора.

2. Схема приготовления хлорно-известкового молока.

Концентрация хлорно-нзвсстко-вого молока (в %)

Количество хлорной извести в граммах на 10 л воды при содержании в ней активного хлора (в %)

В таблице показана взаимосвязь между содержанием активного хлора в хлорной извести и ее количеством, необходимым для приготовления 10 л хлорно-известкового молока 10—20% концентрации.

3. Хлорамин — содержит 25—26,5% активного хлора.

В микробиологических лабораториях пользуются 0,2— 10% растворами хлорамина.

Концентрация раствора (в%)

Количество хлорамина в 1 г на:

Приготовление маточного раствора хлорной извести

1. Взять емкость (стеклянные бутыли темного стекла с притертой пробкой, эмалированная или стеклянная посуда) и поместить в нее 1 кг сухой хлорной извести, после чего, продолжая помешивать, добавить постепенно небольшое количество воды до получения кашицеобразной массы. И затем, перемешивая, добавить воду до объема 10 литров, т. е. для приготовления 10% р-ра хлорной извести необходимо взять: 1 кг сухой хлорной извести + 9 литров воды = = 10 литрам раствора.

2. Свежеприготовленные растворы оставляют на 24 часа в прохладном темном помещении в закрытой посуде. Через 24 часа осторожно, не взбалтывая осадка, сливают осветленный раствор в другую емкость (стеклянные емкости темного цвета, эмалированная или пластмассовая посуда) для хранения до 10 дней.

3. При приготовлении маточного раствора на емкости (на этикетке, которая крепится на ней) указывается дата приготовления, концентрация раствора, должность, фамилия лица, приготовившего раствор.

Внимание! Использование оцинкованной посуды запрещено. Дезрастворы группы фенола

1. Карболовая кислота. Жидкая карболовая кислота содержит 90% кристаллического фенола и 10% воды. В микробиологических лабораториях используют 3—5 % растворы карболовой кислоты.

Схема приготовления растворов карболовой кислоты

2. Хромовая смесь. Пропись приготовления:

В колбу наливают 150 мл концентрированной серной кислоты, туда же всыпают 25 г двухромовокислого калия. Полученную смесь оставляют стоять до растворения. Через сутки раствор темно-оранжевого цвета может быть применен для мытья посуды. Перед употреблением смесь надо подогреть до 45—50°С. Если цвет смеси меняется на темно-зеленый, это говорит о ее непригодности.

Выделение бактериофага из патологического материала

Исследуемую жидкость фильтруют от микробов.

Твердый исследуемый материал (почва, пищевые продукты, оформленные испражнения) измельчают в ступке, эмульгируют, фильтруют. Наличие фага в полученном фильтрате определяют в жидких питательных средах или на плотных средах по методу Отто или Грациа.

Обнаружение бактериофага на плотных питательных средах по методу Отто

1,5% МПА разливают в чашки Петри (более высокая концентрация агара угнетает развитие колоний бактериофага). После застудневания МПА засевают 16—18-часовой бульонной культурой бактерий, гомологичных искомому фагу. Для получения сплошного роста посев растирают шпателем. Спустя 5—10 мин после посева на подсушенную поверхность каплями наносят исследуемый фильтрат. Чашки ставят в термостат на 18—24 часа при температуре 37°С.

Нет результатов: доказательством наличия бактериофага служит полное отсутствие роста культуры в месте попадания капли фильтрата (активный бактериофаг) или появление в этом месте мелких стерильных пятен-колоний бактериофага (бактериофаг слабой активности).

Техника фаготшшрования микробов по методу Креджи и Иенсена

В основу фаготипирования положен принцип совместного выращивания типируемой культуры с типовым бактериофагом. Наступление лизиса определяет типовую принадлежность бактерий. Для фаготипирования бактерий применяют 1,5% МПА с 5% глицерина. Пророщенную бульонную культуру каплями наносят на поверхность питательной среды. Капли не должны растекаться. Они должны впитаться в течение 3—10 мин.

Затем на поверхность каждой капли наносят по 1 капле типового фага с таким расчетом, чтобы часть культуры оставалась свободной от воздействия бактериофага (для контроля роста культуры). Чашки помещают в термостат при температуре 37°С: через 6—8 часов производят учет результатов фаготипирования.

Наличие хорошо выраженного лизиса исследуемой культуры с одним из типовых фагов указывает на принадлежность культуры к данному фаготипу.

Приложение 7.4 (справочное)

СП 1.2.731—99

Средства и методы дезинфекции, используемые при работе с микроорганизмами III—IV групп патогенности

I. Бактерии, не образующие спор

1. Хлорамин Б или ХБ (содержание активного хлора — АХ не менее 26%):

0,5%, 1%, 2%, 3%-е (по препарату) растворы.

2. Хлорная известь (содержание АХ не менее 25%):

сухое вещество;

0,5%, 1%, 2%-е (по препарату) осветленные растворы;

10%-е (по препарату) осветленные и неосветленные растворы;

20%-и (по препарату) хлорно-известковое молоко.

3. Известь белильная термостойкая (содержание АХ не менее 25%):

сухое вещество;

0,5%, 1%, 2%-е (по препарату) осветленные растворы;

10%-е (по препарату) осветленные и неосветленные растворы.

4. Нейтральный гипохлорит кальция — НГК (содержание АХ не менее 52% для марки А и не менее 24% для марки Б):

сухое вещество;

0,15%-й (по АХ) раствор;

0,25%, 0,5%, 1 %-е (по АХ) осветленные растворы;

5%-е (по препарату) осветленные и неосветленные растворы.

5. Гипохлорит кальция технический — ГКТ (содержание АХ не менее 35%):

сухое вещество;

1%, 1,5%-е (по препарату) осветленные растворы;

5%-е (по препарату) осветленные и неосветленные растворы.

6. Двутретьосновная соль гипохлорита кальция — ДТС ГК (содержание АХ не менее 47%):

сухое вещество;

0,25 %, 0,5 %, 1 %-е (по препарату) осветленные растворы;

5%-е (по препарату) осветленные и неосветленные растворы.

7. Двуосновная соль гипохлорита кальция — ДСГК (содержание АХ не менее 30%):

сухое вещество;

1 %-й (по препарату) осветленный раствор;

5%-е (по препарату) осветленные и неосветленные растворы.

8. Гипохлорит натрия (содержание АХ не менее 14%):

1%-й (по АХ) раствор.

9. Гипохлорит натрия, получаемый методом электролиза поваренной соли на установках, разрешенных к производству и применению 0,125%, 0,25%-е (по АХ) растворы.

10. Анолиты, получаемые на установках, разрешенных к производству и применению:

с содержанием 0,03%, 0,05%, 0,06% АХ.

11. Спорокс (содержание АХ не менее 2,5%):

2%, 5%-е (по препарату) растворы.

12. ДП-2 (содержание АХ не менее 40%)

0,1%, 0,2%-е (по препарату) растворы. 13.Дезоксон-1 или дезоксон-4 (содержание надуксусной кислоты — НУ К не менее 5%):

1%, 2%-е (по препарату) растворы.

14. Пергидроль (содержание перекиси водорода 30—35%):

3%-й (по ДВ) раствор перекиси водорода;

3%-й (по ДВ) раствор перекиси водорода с 0,5% моющего средства («Прогресс», «Новость», «Астра», «Лотос»);

6%-й (по ДВ) раствор перекиси водорода.

15. ПВК (содержание перекиси водорода не менее 30%):

0,5%, 0,75%, 2%-е (по перекиси водорода) растворы.

16. Пероксимед (содержание перекиси водорода 30% и ПАВ):

3%-й (по перекиси водорода) раствор.

17. Пероксогидрат фторида калия — ПФК-1 (содержание перекиси водорода не менее 30%):

3%, 6%, 7%, 9%-е (по препарату) растворы.

18. Полисепт (содержание полигексаметиленгуанидина хлорида 25%):

1 %-й (по препарату) раствор.

19. Демос (содержащий комплекс катионных и др. ПАВ):

5%, 10%-е (по препарату) растворы.

20. Велтолен (содержание клатрата мочевины с дидецилди-метиламмоний бромида 20%):

1 %-й (по препарату) раствор.

21. Фогуцид (содержание пол игексаметиленгуанидина фосфата 19-25%):

0,5—1 %-е (по ДВ) растворы.

22. Ника-экстра М (содержание алкилдиметил бензил аммоний хлорида 3,5—4,5%):

0,5%, 2%-е (по препарату) растворы.

23. Лизол А (содержание фенолов 50%):

5%-й (по препарату) раствор.

24. 1-хлор-р-нафтол:

0,5%, 2%-е (по препарату) растворы.

25. Едкий натр:

10%-и (по препарату) раствор.

26. Аламинол (содержит катамин АБ, глиоксаль и др.):

1%-й (по препарату) раствор.

27. Бианол (содержит глутаровый альдегид, глиоксаль и ка-тамин АБ):

1,5%-й (по препарату) раствор.

28. Глутарал или Глутарал Н (содержание глутарового альдегида 2%):

готовое к применению средство.

29. Формалин:

3%, 10%, 20%, 40%-е (по формальдегиду) водные растворы.

30. Аммиак 25% (по ДВ) водный раствор.

Для нейтрализации формальдегида применяется соотношение 1:1.

31.Дихлор-1, Белка, Блеск, Блеск-2, Санита, Дезус и др. бытовые чистяще-дезинфицирующие средства: пасты, порошки и др. формы.

32. Кипячение:

2%-й раствор пищевой соды;

2%-й раствор кальцинированной соды.

33. Обработка водяным насыщенным паром под давлением (автоклавирование).

34. Этиловый спирт 70%, 96%-е, смесь Никифорова.

35. Обработка горячим воздухом — 180°С.

36. Сжигание.

37. Прокаливание.

38. Обработка в дезинфекционных камерах: паровоздушный, пароформалиновый методы.

39. Аэрозольный метод обеззараживания.

40. Газовый метод (дезинфекция парами формальдегида).

41. Ультрафиолетовое облучение.

II. Микобактерии

1. Хлорамин Б или ХБ (содержание АХ не менее 26%):

5%-й (по препарату) раствор;

0,5% и 1%-е (по АХ) активированные растворы.

2. Хлорная известь (содержание АХ не менее 25%):

сухое вещество;

2—10%-е (по препарату) растворы;

20%-й (по препарату) хлорно-известковое молоко;

0,25 0,5%-е (по АХ) активированные растворы.

3. Известь белильная термостойкая (содержание АХ не менее 25%):

сухое вещество;

2—10%-е (по препарату) растворы;

0,25—0,5%-е (по АХ) активированные растворы.

4. Двутретьосновная соль гипохлорита кальция — ДТС ГК (содержание АХ не менее 47%):

сухое вещество;

20%-ное хлорно-известковое молоко;

1 %-й (по препарату) раствор.

5. Двуосновная соль гипохлорита кальция — ДСГК (содержание АХ не менее 30%):

сухое вещество.

6. Нейтральный гипохлорит кальция — НГК (содержание АХ не менее 52% для марки А и не менее 24% для марки Б):

сухое вещество;

1 %, 5%-и (по АХ) раствор.

7. Гипохлорит кальция технический — ГКТ (содержание АХ не менее 35%):

сухое вещество;

2%-й (по препарату) раствор.

8. Гипохлорит натрия, получаемый методом электролиза на установках, разрешенных к производству и применению:

0,25%, 0,5%-е (по АХ) растворы.

9. Анолиты, получаемые на установках, разрешенных к производству и применению с содержанием 0,05,0,09% АХ.

10. Спорокс (содержание АХ не менее 2,5%):

10%-и (по препарату) раствор.

11. ДП-2 (содержание АХ не менее 35%):

сухое вещество;

0,5%-и (по препарату) раствор.

12. Дезоксон-1 или Дезоксон-4 (содержание надуксусной кислоты — НУК не менее 5%):

0,25%, 0,5%, 1%-е (по НУК) растворы.

13. Пергидроль (содержание перекиси водорода — ПВ — не менее 30%):

3%-и раствор.

14. Пероксимед (содержание ПВ не менее 30% и моющие компоненты):

3 и 4%-е (по ПВ) растворы.

15. ПВК (содержание ПВ не менее 30%):

2,5%-и (по ПВ) раствор.

16. Лизол марки А (содержание фенолов 50%):

5%-и раствор.

17. 1-хлор-р-нафтол:

0,5%-й (по препарату) раствор.

18. Глутарал или Глутарал Н (содержание глутарового альдегида 2%):

готовое к применению средство.

19. Аламинол (содержит катамин АБ, глиоксаль и др.):

1 %-й (по препарату) раствор.

20. Бианол (содержит глутаровый альдегид, глиоксаль и катамин АБ):

1,5%-и (по препарату) раствор.

21. Кипячение:

2%-й раствор пищевой соды;

2%-й раствор кальцинированной соды.

22. Обработка водяным насыщенным паром.

23. Обработка горячим воздухом — 180°С.

24. Сжигание.

25. Прокаливание.

26. Обработка в дезинфекционных камерах: паровоздушный, пароформалиновый методы.

27. Ультрафиолетовое облучение.

Ш. Бактерии, образующие споры

1. Хлорамин Б или ХБ (содержание АХ не менее 26%):

1—4%-е активированные растворы, содержащие 0,25— 1% АХ.

2. Хлорная известь или белильная термостойкая известь (содержание АХ не менее 25%):

сухое вещество;

20%-и осветленный и неосветленный раствор, содержащий не менее 5% АХ;

4%-й осветленный активированный раствор, содержащий не менее 1 % АХ.

3. Нейтральный гипохлорит кальция — НГК (содержание АХ не менее 52%):

сухое вещество;

15%-й осветленный раствор, содержащий не менее 5% АХ;

2%-й осветленный активированный раствор, содержащий не менее 1 % АХ.

4. Двутретьосновная соль гипохлорита кальция — ДТС, ГК (содержание АХ не менее 47%):

сухое вещество;

15%-й осветленный раствор, содержащий не менее 5% АХ;

2%-й осветленный активированный раствор, содержащий не менее 1 % АХ.

5. Двуосновная соль гипохлорита кальция — ДСГК (содержание АХ не менее 30%):

сухое вещество;

4%-й активированный раствор, содержащий не менее 1,2% АХ.

6. Едкий натр:

10%-й раствор (70°С).

7. Пергидроль, содержащий 30—35% перекиси водорода (ПВ):

6%-й раствор ПВ с 0,5% моющего средства («Прогресс», «Новость», «Астра», «Лотос»);

3 %-й раствор ПВ с 0,5 % моющего средства при температуре раствора 50°С.

8. ПВК (содержание ПВ не менее 30%):

раствор, содержащий 4% ПВ при температуре 20°С; раствор, содержащий 3% ПВ при температуре 50°С.

9. Пероксимед (содержание ПВ 30% и ПАВ):

3%-й (по ПВ) раствор при температуре 20 и 50°С;

6%-й (по ПВ) раствор.

10. Дезоксон-1 или дезоксон-4 (содержание ПУК не менее раствор, содержащий 1 % надуксусной кислоты (НУ К).

11. Формалин:

20%, 40% -е (по формальдегиду) водные растворы;

0, 2% -и раствор формальдегида с 0,2% мыла или ОП-10 при температуре 60° С.

12. Кипячение.

13. Прокаливание.

14. Сжигание.

15. Сухой горячий воздух.

16. Обработка паром под давлением.

17. Все емкости, в которых проводится обеззараживание, должны быть закрыты крышкой.

18. Обработка в камерах: паровоздушный и пароформали-1 новый методы.

19. Аэрозольный метод обеззараживания.

ВОПРОСЫ для самоконтроля

Какие физические факторы влияют на клетку? Что такое «антисептика» и «асептика» ? Какие вы знаете «антисептики» ? Что такое «симбиоз», «метабиоз» и «антагонизм» ? Что такое «стерилизация»? Назовите физические способы «стерилизации». Где применяется химическая и механическая стерилизация?

Что такое «бактериофаг» ? Структура и морфология фагов. Как используются фаги в медицине?