Микроэррей (МЭ)

МЭ (microarrey) является сравнительно новым (разработан в 1990-х годах) и весьма перспективным направлением в прикладной молекулярной биологии. В настоящее время наибольшее распространение получила технология микроэррея, основанная на ДНК-олигонуклеотидах, однако развивается и микроэррей с применением моноклональных антител и рекомбинантных антигенов. В частности, подобная технология применяется для диагностики и оптимизации лечения аллергий (рис. 14).

1. Приготовление микрочипа: раскапывание рекомбинантных аллергенов на поверхность активированного предметного стекла (объем капли - нанолитры, количество антигена - десятки пикограмм). Одно стекло содержит 12 ячеек. Каждая ячейка содержит десятки (сотни) различных аллергенов и калибровочную кривую (возрастающие количества IgE) в триплетах. Таким образом, одновременно можно обследовать до 12 пациентов.

2-3. Ход теста:

· раскапывание сывороток пациентов (15 мкл);

· инкубация (IgE пациента соединяются с аллергенами)

· добавление моноклональных антител против IgE, меченных флуорохромом;

· сканирование микрочипа:

· типичная сканограмма микрочипа:

· первые три ряда = калибровочная кривая (интенсивность свечения пропорциональна количеству фиксированных IgE);

· далее профиль сенсибилизации пациента (специфичность и количество IgE в сыворотке пациента).

Аналогичные микроэрреи применяются для обнаружения и исследования аутоантител против различных компонентов (антигенов) соединительной ткани при системных аутоиммунных заболеваниях (ревматоидный артрит, системная красная волчанка и др.).

Обратная техника (фиксация набора моноклональных антител на стекле) используется для анализа белков, полисахаридов, биологически активных соединений, медикаментов, токсинов и др. в составе клинических образцов, причем можно анализировать не только растворы, но и суспензии клеток (точная диагностика (фенотипирование) лейкозов).