Общая схема технологического процесса производства пробиотиков
1.Подготовка производственных помещений, оборудования, посуды, персонала, вентиляционной системы - проводят в соответствии с требованиями инструкций, регламентирующих условия работы со стерильными лекарственными средствами.
2.Подготовка и стерилизация сред (концентрированной, производственной и защитной среды высушивания). Предварительные работы включают:
-качественный подбор необходимых для данной культуры веществ;
-оценку влияния отдельных компонентов на выход целевого продукта;
-нахождение оптимального соотношения составляющих и удешевление сред.
3. Выращивание маточных (до 6 пассажей) и производственных культур. Вначале выращивают маточную культуру из специального штамма при температуре 370 °С, используя различные питательные среды. Производственную культуру выращивают методом глубинного культивирования в реакторах, установленных в боксах. Реакторы оснащены магнитной мешалкой и паровой рубашкой.
4.Розлив жидкого полуфабриката во флаконы. Розлив микробной суспензии в ампулы и флаконы проводят на аппаратах розлива и запайки ампул. Заполненные ампулы и флаконы поступают на сублимацию.
5.Сублимационная сушка. Ампулы помещают в морозильные камеры под углом 750°. Содержимое ампул замораживают при температуре -400 °С, выдерживают при этой температуре 18-24 ч, подвергая сублимации.
6.Укупорка. Ампулы с сухой микробной массой запаивают (флаконы укупоривают) с газовой защитой.
7. Маркировка, упаковка. Ампулы маркируют и упаковывают в пачки по 10 штук.
8. Контроль качества готовой лекарственной формы.
Частная технология препаратов нормофлоры
Лактобактерин. Для производства лактобактерина применяют штамм лактобактерий Lactobacillus plantarum, который относится к роду Lactobacillococcus. Лактобактерий представляют собой грамположи-тельные палочки длиной 0,7-3,0 мкм. Растут в атмосфере СО2, N2, О2.
Лактобактерин сухой (Lactobacterium siccuum) получают по общей схеме для бактерийных препаратов.
/. Приготовление и стерилизация питательных сред:
1.1. Приготовление гидролизованного молока (к прокипяченному обезжиренному молоку с рН 7,7±0,1 добавляют панкреатин и хлороформ, выдерживают при 40±2 °С 72 ч, затем фильтруют, разводят вдвое водой для инъекций, разливают в бутыли и стерилизуют).
1.2. Приготовление дрожжевого аутолизата (хлебопекарные дрожжи разводят в бутылях водой для инъекций и стерилизуют).
1.3. Приготовление среды МРС (к гидролизованному молоку добавляют дрожжевой аутолизат и навески следующих веществ: марганца и магния сернокислого, аммония лимоннокислого, глюкозы и др.).
1.4.Приготовление гидролизата казеина (в реакторе готовят раствор казеина, устанавливают необходимое значение рН, добавляют хлороформ, выдерживают пять суток при 45 °С, затем фильтруют в бутыли и стерилизуют).
1.5.Приготовление казеиново-дрожжевой среды.
1.6.Приготовление защитных сред высушивания (желатин, сахароза,
молоко, натрий лимоннокислый и вода).
2. Получение маточной культуры
(6 пассажей в пробирках, чашках Петри, флаконах и бутылях - в течение 9 суток).
3.Выращивание производственной культуры
(в реакторах с жидкой питательной средой в течение 8-12 ч при 370 °С; в 1 мл микробной суспензии производственного штамма должно быть не менее 6 млрд живых микробных клеток; к полученной микробной суспензии добавляют защитные среды высушивания - сахарозно-желатозную или обрат молока).
4.Розлив лактобактерина в ампулы
(доза зависит от концентрации живых микробных клеток).
5.Лиофильная (сублимационная) сушка:
5.1.Замораживание ампул с лактобактерином, расположенных наклонно под углом 75°, в течение 18-24 ч в холодильной камере до минус 40 °С;
5.2.Лиофилизация (сублимирование) - сушка в условиях глубокого вакуума, длительность сублимации 68-70 ч.
6.Запайка ампул
(в режиме газовой защиты - в атмосфере азота).
7. Контроль качества:
1.1. Описание: кристальная или пористая масса желтовато-белого цвета, кисломолочного запаха и вкуса. Определяют органолептически.
72. Подлинность определяется наличием характерных морфологических, культуральных и биохимических свойств в производственных штаммах лактобацилл.
7.3.Показатель рН растворенного препарата должен составлять 5,5*0,5.
7.4.Остаточная влажность лактобактерина в ампулах или флаконах не должна превышать 3,5%, в таблетках 5%.
7.5.Растворимость. Сухой препарат должен растворяться в воде, очищенной и добавленной из расчета 1 мл на 1 дозу, в течение 5 мин образовывать гомогенную взвесь, желтовато-бежевого цвета. Определяют визуально.
7.6 Бактериальная контаминация проверяется бактериоскопически и бактериологически.
Бактериоскопически - путем просмотра мазков, приготовленных из взвеси растворенного препарата и окрашенных по Граму. В мазках должны быть клетки, характерные для лактобацилл (грамположи-тельные).
Бактериологически — путем посева на питательные среды и инкубации в течение 2-х суток не должно содержаться колоний. Если обнаружили рост хотя бы в одной пробирке или чашке, производят повторный посев удвоенного количества образцов.
В случаях повторного роста серию препарата бракуют. Препарат сухой не должен быть контаминирован посторонней микрофлорой. Препарат в таблетках не должен содержать патогенных и условно-патогенных микроорганизмов; допускается наличие микробов сапрофи-тов в количестве не более 300 на 1 таблетку.
7.7.Специфическая безвредность. Препарат должен быть безвредным для белых мышей при введении его внутрь в количестве одной дозы. Наблюдение за мышами осуществляется в течение 5 суток. В случае гибели за этот срок хотя бы одной мыши контроль повторяют на удвоенном количестве животных. Если мыши не погибнут, препарат считают выдержавшим испытание; в противном случае данную серию препарата бракуют.
7.8.Специфическая активность. По количеству жизнеспособных клеток лактобацилл в 1 дозе препарата и активностью кислотообразо-вания.
7.8.1. Определение количества живых лактобацилл в 1 дозе. Для определения количества живых лактобацилл в одной дозе препарата от каждой серии испытывают не менее 3-х образцов. Содержимое флакона после разведений высевают по 0,1 мл микробной суспензии на 4 чашки Петри. После 44 ч инкубации при t = 37°С производят подсчет выросших колоний и вычисляют содержание живых бактерий в 1 дозе препарата. 7.8.2. Определение активности кислотообразования проводят тит-риметрическим методом при выращивании бифидобактерий в модифицированной печеночной среде. Каждую пробу титруют раствором натрия гидроксида 0,1 моль/л в присутствии индикатора фенолфталеина до появления слабо-розового окрашивания. В одной дозе препарата (1 таблетка) при выпуске должно содержаться не менее 2-109 живых лактобацилл. Показатель активности кислотообразования лактобактерина, выраженный в градусах Тернера (ТО), должен быть не менее 200.
7.9. Определение компонентов стабилизирующей среды высушивания и других веществ, входящих в состав препарата.
8. Маркировка и упаковка
При производстве таблеток лактобактерина микробную суспензию сушат в кассетах. Сухую микробную массу (СММ) протирают через металлическое сито в бутыли с азотом. Таблеточную массу готовят в шаровой мельнице с добавлением к СММ вспомогательных веществ (лактозы, аэросила, кальция стеарата). В таблеточной массе определяют количество живых лактобактерий и рассчитывают массу таблетки. Таб-летирование ведут методом прямого прессования в асептических условиях при строгом соблюдении влажности воздуха (не более 50% при 18 °С). Таблетки передают на фасовку во флаконы. Препарат должен находиться в вакууме, атмосфере азота или стерильного воздуха. С целью защиты бактерийных препаратов от агресивной кислой среды желудка создаются таблетки с ацидорезистентным покрытием, капсулиро-ванные формы, иммобилизованные на сорбенте бактерии. Предприняты попытки создания микрокапсулированных форм пробиотиков.
Продолжительность процесса производства лактобактерина в ампулах и таблетках составляет соответственно 42 и 66 суток. Хранят препарат в сухом, темном месте при Г= 5±3 °С. Срок годности 12 и 6 месяцев. Срок годности равен 12 месяцам, если в одной дозе при выпуске содержится 4 млрд и более живых лактобацилл; 6 - при содержании от 2 до 3,9 млрд. К концу срока годности должно содержаться 1 млрд живых лактобацилл.
Дата добавления: 2016-02-24; просмотров: 4390;