Реакция Сальковского.
Жидкость после проведения пробы Шиффа встряхивают. После расслаивания верхний слой окрашивается в красный цвет, нижний имеет желто-оранжевую окраску с зеленой флуоресценцией.
4.3. Реакция Либермана – Бурхарда.
В пробирку наливают 1 мл хлороформного раствора холестерина, добавляют 0,5 мл уксусного ангидрида и 2 капли концентрированной серной кислоты. Хорошо перемешивают. Образуется красная окраска, переходящая в фиолетовую, затем синюю и зеленую. При незначительном содержании холестерина может сразу появиться зеленая окраска.
Цветные реакции на холестерин определяются дегидратацией и окислением холестерина под действием концентрированной серной кислоты и последующей конденсацией продуктов с образованием соединений с сопряженными двойными связями, дающими с серной кислотой различные окрашенные производные.
Опыт 5. Количественное определение общего холестерина в сыворотке крови прямым методом по реакции Златкис – Зака.
Метод основан на реакции холестерина с уксусной и серной кислотами в присутствии хлорида железа.
К 0,1 мл сыворотки крови прибавляют 3 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл рабочего раствора хлорида железа, перемешивают. Готовят контроль: к 0,1 мл дистиллированной воды прибавляют 3 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл рабочего раствора хлорида железа. Оставляют на 15 минут.
Колориметрируют против контроля на фотоэлектроколориметре при длине волны 510-560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 1 см.
Из стандартного раствора холестерина готовят разведения, как указано в таблице 4.
Таблица 4. Приготовление растворов холестерина для построения калибровочного графика.
| № пробирок | Стандартный раствор холестерина, мл | Ледяная уксусная кислота, мл | Рабочий раствор хлорида железа, мл | Содержание холестерина в пробе, мг% |
| 0,1 | 3,0 | 2,0 | ||
| 0,2 | 3,0 | 2,0 | ||
| 0,3 | 3,0 | 2,0 | ||
| 0,4 | 3,0 | 2,0 | ||
| 0,5 | 3,0 | 2,0 |
Через 20 минут пробы фотометрируют против контроля. По результатам строят калибровочный график.
По калибровочному графику определяют содержание холестерина в сыворотке крови. Норма содержания холестерина в сыворотке крови – 120-250 мг% (3,12-6,50 ммоль/л).
Контрольные вопросы
1. Почему чаще встречается гиперхолестеролемия, а не гипохолестеролемия?
2. Как изменится синтез холестерина при питании только растительной пищей? Почему?
3. Укажите, в каких органах происходит синтез холестерина «на экспорт».
4. Каким образом большая часть холестерина выводится из организма?
5. В чем различие функций фосфолипидов и триацилглицеролов?
Дата добавления: 2015-03-19; просмотров: 2204;