Окраска спор

При исследовании живых неокрашенных препаратов, изготовленных из старых, главным образом, агаровых культур, споры чаще всего обнаружи­ваются в виде овальных или круглых образований, резко преломляющих свет. Зрелые споры обычными растворами красок не окрашиваются. В микробной клетке споры располагаются или в центре ее (экваториально), или на конце (терминально), или ближе к концу палочки (субтерминально). Споры имеют очень плотную оболочку, состоящую из наружного и внутреннего слоев. Все специальные методы окраски спор основаны на действии различных протрав, изменяющих структуру оболочки и тем облегчающих проникновение в споры красящего вещества. После протравливания препараты окраши­вают обычно карболовыми растворами красок с подогреванием мазка, после­дующим обесцвечиванием и дополнительной окраской.

Неокрашенные споры живых бактерий имеют при наблюдении в обычный микроскоп черное обрамле­ние и ярко светятся в плоскости, находящейся немного выше положения истинного фокуса. Не следует считать, однако, что любая сильно преломляющая свет структура внутри бактерии — это эндоспора, особенно если отсут­ствует информация о теплоустойчивости.

Прямой тест на присутствие эндоспор возможен благо­даря явлению, которое наблюдается во многих эндоспорах после погружения в окислитель в кислой среде (например, 0,1% KМnO₄ в 0,3н НNО₃ или 0,3н НСl). При этом оболочка споры теряет целост­ность, а часть ее протоплазмы, теперь легко окрашивае­мая основными красителями, выпячивается наружу че­рез образовавшуюся брешь. Из-за поразительной скоротечности происходящего события (менее 20 минут пребы­вания в растворе окислителя) этот тест заслуживает названия «проверки на лопанье» (popping test). Его удобно проводить, помещая высушенную на покровном стекле пленку спор на 10—20 минут в раствор окислителя; «лопнувшие» споры видны без окраски, хотя последняя делает их более легко различимыми.

Имеется несколько удовлетворительных методов для окрашивания эндоспор в бактериях. При использовании простейшего из них — негативного окрашивания — по­лучают нефиксированные препараты, материал которых имеет негативный вид. Для осуществления метода взя­тый петлей 7% (вес/объем) водный нигрозин сме­шивают на покровном стекле с набранной петлей куль­турой, смесь распределяют в виде тонкой пленки и вы­сушивают на воздухе. Покровное стекло переворачива­ют пленкой вниз, помещают на предметное стекло и закрепляют в нескольких местах свечным воском. Эндо­споры выглядят, как сильно преломляющие свет сфери­ческие или эллипсоидальные образования, находящиеся как внутри, так и за пределами клеток бактерий.

Эндоспоры очень устойчивы к простому окрашива­нию, но, будучи однажды окрашенными, они довольно устойчивы и к обесцвечиванию.

Полезным методом пози­тивного окрашивания бактериальных эндоспор является метод Дорнера.