Состав некоторых питательных сред (из Ahuja, 1983, концентрация вещества указана в миллиграммах на литр)

 

Вещество MS WPM АСМ*
Неорганические вещества  
NH4N03
KN03 - -
CaN034H20
K2S04 -
CaCL, 2H20
MgS0420
KH2P04
Na2 EDTA2H20 37,25 37,30 -
FeS04 7 RO 4 2 27,85 27,85 -
Sodium Ferric EDTA - - 30,0
MnS044H,0 4 2 22,3 22,3 22,3
ZnS04 7H,0 4 2 8,6 8,6 8,6
H,B03 6,2 6,2 6,2
KJ 0,83 - 0,83
Na2Mo04 2H20 0,25 0,25 0,25
CuS045H,0 4 2 0,025 0,25 0,025
CoCl2 6H20 0,025 - 0,025
Op ганические вещества  
Тиамин НС1 0,1 1,0 0,1
Никотиновая кислота 0,5 0,5 0,5
Пиридоксин НС1 0,5 0,5 0,5
Глицин 2,0 2,0 -
Лизин - -
Мио-инозитол
Сахароза 30 000 30 000 30 000
•ACM (Aspen Culture Medium) — среда для культивирования о< :ины

Обязательным условием является присутствие в среде кроме эле­ментов питания гормональных факторов или имитаторов их дей­ствия. Известно пять групп соединений, относящихся к категории фитогормонов. Это цитокинины, ауксины, гиббереллины, абсцизовая кислота и этилен. При in vitro было выявлено, что для дедифференциации, превращения специализированной клетки в меристематическую, способную к делению, необходимо участие двух и более гормонов, относящихся к разным группам.

Цитокинины снимают апикальное доминирование и индуциру­ют развитие пазушных почек, нарушают покой и стимулируют рост покоящихся органов. Они регулируют рост соматических зароды­шей и формирование растений; необходимы для дифференциации стеблевых почек в культуре каллусных клеток и при регенерации побегов из клеток эксплантов. К группе цитокининов относятся: кинетин, БАП (6-бензиламинопурин), зеатин и др. Дополнитель­ное введение в питательную среду некоторых аминокислот — тиро­зина, фенил-аланина, а также фосфатов, способствует усилению эффекта цитокининов.

Ауксины влияют на деление, растяжение клеток и дифференцировку. Наиболее выраженный органогенный эффект ауксина — это стимуляция образования корней. К группе ауксинов относятся: ИУК (β-индол-3-уксусная кислота), индолилмасляная кислота (ИМК), нафтилуксусная кислота (НУК), 2,4-D.

Гиббереллины — обширный класс соединений, включающий более 30 веществ. В микроразмножении растений в основном ис­пользуется гибберелловая кислота (ГК). Экзогенные гибберелли­ны усиливают рост и вытягивание стебля, листьев. Гиббереллины вносят в питательную среду в основном с целью ускорить рост сфор­мировавшихся почек и получить растения с хорошо развитой над­земной частью.

С помощью низких концентраций экзогенных фитогормонов принципиально возможна индукция и стимуляция различных морфогенетических реакций в культуре тканей. При высокой гор­мональной насыщенности питательной среды наблюдается угнете­ние общей активности клеток вплоть до их гибели. Эту специфику реакций культивируемых тканей и органов растений на введение фитогормонов следует учитывать при использовании регуляторов роста с целью размножения растений (Н.В. Катаева, Р.Г. Бутен-ко, 1983).

Процессы индукции органогенеза и соматического эмбриогене­за обнаруживают различную зависимость от экзогенных фитогор­монов. Если индукция корнеобразования четко связана с увеличени­ем концентрации ауксина в питательной среде и то же самое можно признать в отношении кинетина в побегообразовании, то эмбрио­генез в достаточной степени независим от экзогенных фитогормо­нов. Только первые моменты индукции требуют присутствия гормо­нов, тогда как дальнейшее развитие зародыша является процессом, не зависящим от экзогенных гормональных факторов. Развиваю­щийся зародыш сам делается источником необходимых для его раз­вития гормонов (Р.Г. Бутенко, 1975).

В целях экономии труда и времени при создании питательных сред готовят исходные запасные растворы. Рецепты запасных ра­створов для приготовления питательной среды Мурасиге — Скуга приведены ниже (концентрация указана в миллиграммах на литр).

Раствор I NH4N03 33 000 KNO, 38 000 СаС1220 8 800 MgS04 7 Н20 7 400 КН2Р04 3 400

Раствор II

KJ 166

Н,В03 1 240

MnSo4 4H20 4 460

ZnS04 7H20 1 720

Na2Mo04 2H20 50

CuSo4 5H20 5

СоС1220 5

Раствор III FeSO„ 7H20 5 560 Na2EDTA 2 Н20 7 460

Раствор IY

Иноситол 20 000

Никотиновая к-та 100

Пиридоксин НС1 100

Тиамин НС1 100

Глицин 400

При приготовлении раствора IIIFeS04 7H20 и Na2EDTA 2H20 растворяют отдельно в 450 мл дистиллированной воды (подогревая и постоянно помешивая раствор), затем смешивают, устанавлива­ют рН=5,5 и добавляют воды до 1 л. Последовательность приготов­ления питательной среды с использованием запасных растворов следующая:

• Необходимое количество агара и сахарозы растворяют в 750 мл дважды (для гарантии стерильности) дистиллированной воды. Де­лают это на водяной бане при повышенной температуре или в авто­клаве при пониженном давлении. Конечная концентрация агара должна быть 0,8-1,0%.

• Добавляют по 50 мл запасных растворов I и IIи по 5 мл запас­ных растворов IIIи IY.

• Количество раствора доводят до 1 л.

Готовая среда охлаждается при комнатной температуре и хранит­ся при 4°С.








Дата добавления: 2017-01-13; просмотров: 638;


Поиск по сайту:

При помощи поиска вы сможете найти нужную вам информацию.

Поделитесь с друзьями:

Если вам перенёс пользу информационный материал, или помог в учебе – поделитесь этим сайтом с друзьями и знакомыми.
helpiks.org - Хелпикс.Орг - 2014-2024 год. Материал сайта представляется для ознакомительного и учебного использования. | Поддержка
Генерация страницы за: 0.006 сек.