Питательные среды, требования к ним.

Микробиологическое исследование - это выделение чистых культур микроорганизмов, культивирование и изучение их свойств.

Для культивирования микроорганизмов необходимы особые субстраты -- питательные среды. На средах микроорганизмы осуществляют все жизненные процессы (питаются, дышат, размножаются).

Питательные среды

Питательные среды являются основой микробиологической работы, и их качество нередко определяет результаты всего исследования. Среды должны создавать оптимальные условия для жизнедеятельности микробов.

Требования, предъявляемые к питательным средам

1) содержать все необходимые питательные вещества (микроэлементы, витамины, некоторые аминокислоты);

2) иметь оптимальную концентрацию водородных ионов -- рН (для большинства патогенных бактерий оптимальна слабощелочная среда (рН 7,2--7,4), исключение составляют холерный вибрион -- его оптимум находится в щелочной зоне (рН 8,5--9,0) и возбудитель туберкулеза, нуждающийся в слабокислой реакции (рН 6,2--6,8);

3) быть изотоничными для микробной клетки, т. е. осмотическое давление в среде должно быть таким же, как внутри клетки. Для большинства микроорганизмов оптимальна среда, соответствующая 0,5% раствору натрия хлорида;

4) быть стерильными: посторонние микроорганизмы препятствуют росту изучаемого м/о, определению его свойств и изменяют свойство среды;

5) плотные среды должны быть влажными и иметь оптимальную для микроорганизмов консистенцию;

Желательно, чтобы среды были прозрачными -- удобнее следить за ростом культур, легче заметить загрязнение среды посторонними микроорганизмами.

Классификация сред

В настоящее время предложено огромное количество сред, в основу классификации которых положены следующие признаки:

1. Исходные компоненты: различают натуральные и синтетические среды. Натуральные среды готовят из продуктов животного и растительного происхождения.

Синтетические среды готовят из определенных химически чистых органических и неорганических соединений. Важное преимущество этих сред в том, что состав их постоянен, поэтому эти среды легко воспроизводимы.

2. Консистенция (степень плотности): Среды бывают жидкие, плотные и полужидкие. Плотные и полужидкие среды готовят из жидких веществ, к которым для получения среды нужной консистенции прибавляют обычно агар-агар или желатин.

Агар-агар -- полисахарид, получаемый из определенных сортов морских водорослей. Он не является для микроорганизмов питательным веществом и служит только для уплотнения среды. В воде агар-агар плавиться при 80-100С, застывает 40-45С.

3. Состав: среды делят на простые и сложные. К первым относят мясопептонный бульон (МПБ), мясопептонный агар (МПА), бульон и агар Хоттингера, пептонную воду. Сложные среды готовят, прибавляя к простым средам кровь, сыворотку, углеводы и другие вещества, необходимые для размножения того или иного микроорганизма.

4. Назначение:

а) основные (МПА, МПБ, бульон и агар Хоттингера, пептонная вода);

б) специальные среды служат для выделения и выращивания микроорганизмов, не растущих на простых средах.

Например, для культивирования стрептококка к средам прибавляют сахар, для пневмо- и менингококков -- сыворотку крови, для возбудителя коклюша -- кровь;

в) элективные (избирательные) среды служат для выделения определенного вида микробов, росту которых они благоприятствуют, задерживая или подавляя рост сопутствующих микроорганизмов (соли желчных кислот, подавляя рост кишечной палочки, делают среду элективной для возбудителя брюшного тифа). Жидкие элективные среды называют средами накопления (пептонная вода с рН 8,0) в ней активно размножается холерный вибрион, а другие бактерии не растут;

г) дифференциально-диагностические среды позволяют отличить (дифференцировать) один вид микробов от другого по ферментативной активности (среды Гисса с углеводами и индикатором, Эндо, Левина, Плоскирева). При росте микроорганизмов, расщепляющих углеводы, изменяется цвет среды;

д) консервирующие среды предназначены для первичного посева и транспортировки исследуемого материала; в них предотвращается отмирание патогенных микроорганизмов и подавляется развитие сапрофитов. Пример такой среды -- глицериновая смесь, используемая для сбора испражнений при исследованиях, проводимых с целью обнаружения ряда кишечных бактерий.