Определение токсигенности микробов

В патологии человека большую роль играют токсигенные микроорганизмы, к которым относятся возбудители ботулизма, столбняка, газовой анаэробной инфекции, дифтерии, а так­же некоторые штаммы бактерий дизентерии Григорьев -Шига, стафилококка и стрептококка и некоторые другие.

Экзотоксины, вырабатываемые различными представите­лями этой группы микробов, обладают резко выраженной токсичностью, высокой избирательностью действия с пораже­нием отдельных органов и тканей и способностью при парен­теральном введении в организм вызывать образование анти­тел—антитоксинов, способных нейтрализовать соответствую­щие им экзотоксины.

Продуцируемые в процессе жизнедеятельности микроба экзотоксины легко диффундируют из клетки в окружающую их питательную среду. Бульонную культуру микроба выдер­живают в термостате в течение 2—3 недель для накопления в ней токсина, затем фильтруют через бактериальный фильтр. Получаемый при этом прозрачный фильтрат содержит неразведенный токсин.

Токсигенность микробов определяют по тому же принципу, что и вирулентность. Единицами измерения токсигенности, как и вирулентности, являются минимальная смертельная до­за (Dlm) и средняя смертельная доза (LD₅₀).

Для определения Dlm и LD₅₀ фильтрат бульонной культуры разводят стерильным изотоническим раствором хлорида натрия в сотни, тысячи и миллионы раз. Каж­дую дозу токсина испытывают одновременно на 6—10 жи­вотных. Для постановки проб подбирают животных, наибо­лее чувствительных к исследуемому токсину. Например, дифтерийный токсин титруют на морских свинках, столбнячный токсин—на мышах.

При учете полученных результатов в протоколе опыта от­мечают дозу введенного токсина, способ его введения, массу тела животного и время наступления его гибели после введе­ния токсина.

Литература

1. Аристовский В.М. др. Учебник медицинской микробиологии. — М: Медгиз, 1949.

2. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. Под ред. Биргера М.О, — М: «Медицина», 1982.

3. Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований. —М.: «Медицина», 1978.

4. Методы общей бактериологии в 3-х т. — М:, «Мир», 1983.

5. Розанов Н.И. Микробиологическая диагностика заболеваний сельскохозяйственных животных. — М:, ГИСХИ. 1952.

6. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Федоров В.Б. Определитель зоопатогенных микроорганизмов. — М.: «Колос», 1995.

7. Тимаков В.Д., Гольдфарб Д.М. Основы экспериментальной медицинской бактериологии. — М.: Медгиз, 1958.

Оглавление

Введение............................................................................................................................... 3

Бактериологическая лаборатория................................................................................ 3

Помещение бактериологической лаборатории и оборудование рабочего места 4

Правила работы и поведения в лаборатории....................................................... 7

Уборка лабораторного помещения..................................................................... 8

Мытье и обработка лабораторной посуды............................................................... 9

Дезинфекция...................................................................................................................... 13

Стерилизация.................................................................................................................... 14

Подготовка и стерилизация лабораторного оборудования........................... 14

Виды стерилизации.................................................................................................... 16

Микроскопические методы исследования............................................................... 21

Приготовление препаратов для микроскопирования живых микроорганизмов. 21

Приготовление мазков............................................................................................... 26

Окраска мазков............................................................................................................ 28

Простые методы окраски мазков....................................................................... 31

Окраска по Муромцеву.................................................................................... 31

Сложные (дифференциальные) методы окраски мазков............................. 32

Окраска по Граму.............................................................................................. 32

Видоизменения метода окраски по Граму...................................................... 34

Окраска по Граму в модификации Хукера...................................................... 35

Окраска по Граму в модификации Берка.................................................... 36

Модификация по Синеву.................................................................................. 37

Модификация по Эткинсу................................................................................ 38

Окраска кислотоустойчивых микробов........................................................... 39

Окраска по Циль-Нильсену............................................................................. 39

Метод Труанта окрашивания на кислотоустойчивость......................... 41

Метод Гонзеля.................................................................................................. 422

Метод Бунге и Траутенрота........................................................................... 43

Окраска по Вейксельбауму (на спиртоустойчивость).......................... 432

Окраска по Грам-Муху (на грамофильную зернистость)...................... 43

Способ Нейссера................................................................................................ 44

Метод Пью (окраска метахроматических зерен)...................................... 44

Окраска по Романовскому-Гимза.................................................................. 44

Окраска капсул..................................................................................................... 446

Метод окраски капсул по Дюгиду.............................................................. 446

Метод окраски капсул по Гиссу.................................................................... 46

Метод окраски капсул по Антони................................................................. 46

Способ Михина.................................................................................................. 46

Способ Гисса....................................................................................................... 46

Способ Ольта...................................................................................................... 47

Способ Ребигера................................................................................................. 47

Способ Гусельниковой..................................................................................... 48

Способ Кауфмана.............................................................................................. 48

Способ Ионе........................................................................................................ 48

Окраска спор............................................................................................................ 48

Метод окрашивания эндоспор по Дорнеру................................................ 49

Метод окраски эндоспор по Шефферу -Фултону................................... 510

Метод Виртца в модификации Саватеева................................................ 510

Способ Пешкова............................................................................................... 521

Способ Мюллера............................................................................................. 532

Способ Ауески.................................................................................................. 532

Способ Клейна:.................................................................................................. 52

Окраска жгутиков................................................................................................... 53

Метод окраски жгутиков по Грэю................................................................. 54

Метод окраски жгутиков по Ляйфсону........................................................ 55

Окраска жгутиков серебрением..................................................................... 56

Способ Уварова.................................................................................................. 58

Способ Леффлера............................................................................................... 58

Способ Инуйе...................................................................................................... 59

Способ Бениньетти и Джино........................................................................... 59

Цитоплазматические включения........................................................................ 59

Окрашивание поли-β-оксимасляной кислоты......................................... 610

Окрашивание полифосфата.......................................................................... 610

Окрашивание полисахаридов с использованием реактива Шиффа. 620

Метод окраски полисахаридов альциановым синим.............................. 61

Питательные среды......................................................................................................... 62

Техника посева микроорганизмов.............................................................................. 69

Техника посевов на плотные и жидкие питательные среды.................. 71

Получение чистых культур................................................................................. 7274

Посев штрихом.................................................................................................... 74

Получение чистой культуры методом рассева в глубине среды (по Коху) 75

Выделение чистой культуры по способу Дригальского...................... 776

Анаэростат для культивирования анаэробов............................................ 76

Методы, позволяющие изучить культуральные свойства микроорганизмов 76

Рост микробов на плотной питательной среде................................................... 76

Особенности микробного роста на жидких питательных средах................ 79

Рост на полужидкой питательной среде.............................................................. 80

Методы изучения биохимических свойств микроорганизмов............................ 80

Сахаролитические свойства микроорганизмов........................................ 81

Протеолитические свойства микроорганизмов......................................... 82

Определение индола в культуре микроорганизмов................................. 83

Определение сероводорода............................................................................ 83

Окислительно-восстановительные свойства микроорганизмов............... 84

Определение редуцирующей способности................................................. 85

Определение фермента каталазы.................................................................. 85

Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам................ 85

Лабораторные животные.............................................................................................. 87

Краткие сведения о содержании, разведении, кормлении и заболеваниях лабораторных животных 88

Правила пополнения вивария новыми животными........................................... 90

Правила содержания экспериментальных животных в виварии......... 91

Уборка и дезинфекция вивария.................................................................. 9698

Личная гигиена работников питомника (вивария)................................... 97

Правила кормления лабораторных животных.......................................... 97

Заболевания лабораторных животных................................................................ 99

Подготовка животных к заражению............................................................... 10301

Фиксация, методы заражения и взятия крови у лабораторных животных 10705

Способы заражения........................................................................................ 11109

Наркоз лабораторных животных........................................................... 11209

Внутрикожный метод................................................................................. 11210

Подкожный способ заражения................................................................ 11310

Внутримышечный способ заражения................................................... 11310

Внутрибрюшинный способ заражения................................................. 11311

Внутривенное заражение кроликов....................................................... 11411

Внутривенное заражение крыс и мышей.............................................. 11412

Заражение через пищеварительный тракт.......................................... 11412

Заражение через дыхательные пути (интраназальное заражение) 11614

Заражение в переднюю камеру глаза (интраокулярный метод)... 11614

Внутримозговой метод (интрацеребральный).................................... 11714

Внутриплевральный метод...................................................................... 11815

Содержание животных под опытом...................................................... 11815

Взятие крови у лабораторных животных и ее обработка................... 11815

Умерщвление и вскрытие лабораторных животных...................................... 12219

Вскрытие животных............................................................................................ 12220

Определение вирулентности микробов.............................................................. 12522

Определение токсигенности микробов............................................................... 12724

Литература................................................................................................................. 12825

Дмитрий Аркадьевич Васильев
Сергей Николаевич Золотухин

Анатолий Анисимович Щербаков

Лидия Владимировна Карпунина